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应用脂肪干细胞与丝素蛋白和壳聚糖支架材料共同构建细胞—支架复合物的实验研究

作 者: 郝晨光
导 师: 王志军
学 校: 大连医科大学
专 业: 整形外科学
关键词: 脂肪干细胞?诱导分化?骨形态发生蛋白?丝素蛋白/壳聚糖支架?软骨细胞
分类号: R329
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


目的:研究脂肪干细胞软骨细胞培养诱导的方法;用丝素蛋白和壳聚糖作为三维多孔支架材料,研究它的制作方法和特点;探讨用诱导后的软骨细胞与丝素蛋白和壳聚糖支架材料体外构建细胞-支架复合物的可行性。方法:(1)采用贴壁分离方法从人体脂肪组织抽吸液中分离出脂肪干细胞,培养扩增,传到第三代时在骨形态发生蛋白和碱性成纤维细胞生长因子的软骨细胞诱导培养基中,诱导脂肪干细胞向软骨细胞转化。Ⅱ型胶原免疫组织化学检测细胞特性。(2)以丝素蛋白、壳聚糖为支架原料,蚕丝经过溶解、脱胶、透析后得丝素蛋白溶液,与壳聚糖溶液混合溶解,得混合溶液。冷冻干燥法制成丝素蛋白/壳聚糖三维立体多孔支架材料,通过体积法计算支架孔隙率,通过扫描电镜对支架的外观和性能进行观察和测量。(3)将诱导后的细胞接种于消毒灭菌过的支架材料上,细胞与支架复合物联合培养。扫描电镜观察细胞-支架复合物的外观和内部结构,以及细胞在支架里的生长情况。结果:(1)脂肪组织通过消化得到脂肪干细胞,并且通过培养基培养长势良好。三代的脂肪干细胞在骨形态发生蛋白和碱性成纤维细胞生长因子的软骨诱导培养基中诱导培养,细胞的形态发生改变,呈软骨细胞的特点。由长梭形变为多边形,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阳性。(2)制作完成的丝素蛋白/壳聚糖三维多孔支架呈白色,呈海绵状,可见纤维状排列。支架材料表面均匀,柔软有弹性,孔隙大小均匀,没有明显突起和凹陷。支架的孔隙率大于80%。以不同比例制作的支架以丝素蛋白和壳聚糖的比例5:5和4:6最为合适。(3)诱导后的细胞接种在支架上在培养基中联合培养,扫描电镜显示细胞与支架黏附良好,细胞可以在支架材料里面贴附生长。结论:(1)脂肪干细胞在软骨培养基中,通常单独应用一种细胞生长因子都可以诱导其成软骨细胞。在本实验中联合应用骨形态发生蛋白14和碱性成纤维细胞生长因子两种细胞生长因子较单独应用骨形态发生蛋白能更好的诱导脂肪干细胞向软骨细胞方向分化。细胞长的更好,更密集。(2)蚕丝和壳聚糖两种天然材料通过混合溶解得到的多孔三维立体支架材料经测得空隙率大于80%,有利于细胞的渗透和营养物质的交换。三维立体环境也可以给细胞提供适宜的微环境。所有丝素蛋白/壳聚糖支架可以作为软骨组织工程的三维多孔支架。(3)脂肪干细胞经过诱导后的软骨细胞可以很好的附着在丝素蛋白和壳聚糖支架上,细胞可以在表面和内部生长。本实验的细胞-支架复合物可以用来作为组织工程软骨的实验研究。

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摘要??7-9Abstract??9-11前言??11第一部分??11-21??前言??11-12??材料和方法??12-16??结果??16-18??讨论??18-20??结论??20-21第二部分??21-29??实验材料??21??实验方法??21-25??讨论??25-28??结论??28-29参考文献??29-31综述??31-40??正文??31-37??参考文献??37-40附录??40-42致谢??42

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体形态学 > 人体组织学
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